肺炎链球菌多重巢式荧光PCR分型方法的建立和应用

目的 建立一种敏感且节省标本的多重巢式荧光PCR方法,用于临床标本中肺炎链球菌的分型.方法 以检测肺炎链球菌种属(lytA基因)和20组常见血清型的引物和探针为基础,分别采用92株不同血清型的肺炎链球菌菌株和系列稀释的参考DNA模板,建立多重巢式荧光PCR方法.评价该方法的特异性和敏感性,同时与荧光PCR方法进行比较.将该方法用于14份肺炎链球菌培养阳性和30份肺炎链球菌培养阴性的临床标本的检测,评价实际应用效果.结果 多重巢式荧光PCR与荧光PCR方法能准确鉴定/区分大部分菌株(90/92)的血清型.前者的检测灵敏度为1～100 fg/μl,9种血清型的灵敏度高于荧光PCR方法(10～100fg/μl).44份临床标本中,多重巢式荧光PCR与荧光PCR方法分别检测出34和31份阳性(P=0.778),2种方法的DNA模板使用量分别为15μl和66μl.结论 多重巢式荧光PCR比荧光PCR方法节省标本且更加灵敏.