麦氏弧菌多位点序列分型方法的建立与应用

目的 建立针对麦氏弧菌的多位点序列分型(MLST)方法,评价该方法的分型效果,并对收集的麦氏弧菌进行MLST分析.方法 筛选出7个管家基因(ftsZ、gapA、mreB、gyrB、purM、recA、ropA),设计特异引物,在17株麦氏弧菌中PCR扩增管家基因序列.用DnaSP 6.12.03软件和Split tree 4.0软件评价基因多态性、中性进化和基因重组情况;根据7个管家基因的序列差异获得对应的序列分型(ST)型别,用BioNumerics 7.1软件对不同ST型别构建最小生成树和聚类图,并用eBURST 3.0软件计算克隆复合体(CCs).结果 所选的管家基因具有足够多的等位基因位点、序列差异和足够高的分辨率;7个管家基因的Splittree对所有麦氏弧菌的聚类一致;中性试验结果显示,7个管家基因在进化过程中受遗传漂变的影响较小.MLST将17株麦氏弧菌分成14个ST型别,大多数菌株(64.70％)均单独形成一个ST型别,其中ST007形成了可能的优势克隆群.这些菌株之间存在相对较远的遗传距离,在垂直传播上呈现出潜在的地域聚集性.结论 本研究建立的麦氏弧菌的MLST方法能分析麦氏弧菌的种群结构和遗传进化关系.