HeLa/GFP-Plk1/Cherry-H2B稳定细胞系的构建

目的：构建可研究Polo样激酶1（Plk1）定位的HeLa细胞系。方法：用PCR方法扩增Plk1基因，定向克隆到pRex-EGFP-IRES-Hygro载体中，构建pRex-EGFP-Plk1-IRES-Hygro表达载体；利用逆转录病毒感染的方法，向HeLa细胞系中依次转染pRex-EGFP-Plk1-IRES-Hygro、pRex-Cherry-H2B-IRES-Hygro，构建Hela/GFP-Plk1/Cher-ry-H2B稳定细胞系；激光共聚焦显微镜观察Hela/GFP-Plk1/Cherry-H2B稳定细胞系在不同有丝细胞分裂期时Plk1的定位。结果：质粒酶切及测序证明pRex-EGFP-Plk1-IRES-Hygro载体构建正确；在Hela/GFP-Plk1/Cherry-H2B稳定细胞系有丝分裂中期和末期时，观察到Plk1分别定位于着丝粒和中间体上。结论：构建了Hela/GFP-Plk1/Cherry-H2B稳定细胞系，为研究Plk1在有丝分裂不同时期的调控机制提供了细胞模型。