全人源抗人肿瘤坏死因子-α单克隆抗体毛细管等电聚焦鉴别方法的建立及验证

目的 建立用于全人源抗人肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)单克隆抗体鉴别的毛细管等电聚焦(capillary isoelectric focusing,cIEF)方法,并进行验证.方法 通过优化cIEF过程中各关键实验参数,如阴极稳定剂浓度、阳极稳定剂浓度、两性电解质浓度、3-10与8-10.5两性电解质比例、聚焦时间、聚焦电压,建立cIEF方法,并对方法的专属性、重复性、中间精密度进行验证.结果 确定cIEF方法的实验参数为:阴极稳定剂浓度30 mmol/L,阳极稳定剂浓度3.2 mmol/L,3-10两性电解质在样品溶液中体积比为6.0％,聚焦电压为25 kV,聚焦时间为10 min.保护剂在样品出峰时间无紫外吸收峰,阳性对照阿达木单抗与样品出峰时间及峰形一致,阴性对照利妥昔单抗生物类似药、贝伐珠单抗、曲妥珠单抗生物类似药、西妥昔单抗与样品出峰时间及峰形均不一致,且对样品无干扰;样品制备重复性主峰等电点的相对标准差(relative standard deviation,RSD)为0.114％,中间精密度RSD为0.837％.结论 建立的cIEF方法pH梯度和精密度良好,专属性较强,适用于制品的批放行鉴别试验.