聚肌苷酸胞苷酸在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活干扰素β荧光素酶报告基因系统实验条件的优化

目的 优化不同长度聚肌苷酸胞苷酸[polyinosinic acid:polycytidylic acid,poly(I∶C)]在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活I型干扰素(IFNβ)荧光素酶报告基因系统的实验条件.方法 将质粒IFN-β-1uc分别转染HEK293T及BEAS-2B细胞后,HEK293T细胞转染不同浓度(0.25、0.5、1.0、1.5和2.0μg/孔)的高分子量(HMW)poly(I∶C)和低分子量(LMW)poly(I∶C),检测其对HEK293T细胞中IFNβ启动子激活的影响;BEAS-2B细胞直接加入不同浓度(0.1、1.0、10.0、20.0和50.0μg/孔)及转染不同浓度(同HEK293T细胞)的HMW poly(I∶C)和LMWpoly(I∶C),检测其对BEAS-2B细胞中IFNβ启动子激活的影响.结果 poly(I∶C)转染HEK293T细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:0.5 μg/孔的HMW poly(I:C)和LMW poly(I∶C)转染24 h.poly(I∶C)直接加入BEAS-2B细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:50 μg/孔的HMW poly(I∶C)和LMW poly(I∶C)作用6h;poly(I∶C)转染BEAS-2B细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:0.25 μg/孔的HMW poly(I∶C)转染12 h,0.5μg/孔的LMW poly(I∶C)转染12h.结论 成功优化了poly(I∶C)在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活IFNβ启动子的实验条件,为poly(I∶C)激活免疫反应机制的研究提供了实验依据.