GPR183慢病毒载体的构建及对Cutll1细胞凋亡的影响

该文旨在构建过表达人,GPR183的慢病毒载体,研究GPR183对急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)细胞Cutll1凋亡的影响.通过PCR法扩增人GPR183序列片段,并连接到慢病毒表达载体质粒pEZ-Lv201上,构建过表达GPR183慢病毒质粒,包装病毒,感染T-ALL Cutll1细胞,q-PCR及Westem blot检测细胞GPR183表达水平;检测GPR183对Cutll1细胞生长、周期及凋亡影响.质粒PCR及测序结果显示,成功构建GPR183过表达慢病毒载体.感染Cutll1细胞后荧光显微镜下观察到绿色荧光,过表达组GPR183 mRNA及蛋白表达水平较对照组明显上升(P＜0.01),成功构建过表达GPR183的Cutll1细胞株,过表达GPR183的Cutll1细胞生长明显受到抑制(P＜0.001),凋亡水平较对照组显著升高(P＜0.01),但不影响细胞周期.初步显示,GPR183能明显抑制T-ALL Cutll1细胞增长,促进细胞凋亡,为后续研究奠定基础.