蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

为制备蓝舌病病毒(BTV)8型VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究采用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后取小鼠脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以纯化的重组VP2蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出两株能够稳定分泌抗BTV8VP2蛋白的MAbs杂交瘤细胞株(2G4和3B7).间接免疫荧光结果表明:2G4和3B7与BTV8均呈阳性反应,与BTV1～7、BTV9～24、茨城病毒、中山病毒以及赤羽病毒均呈阴性反应.Western blot结果显示,2G4和3B7均能够识别BTV8及BTV8重组VP2蛋白.Ig亚类鉴定2G4和3B7均为IgG1/κ链.利用原核表达的96条覆盖VP2全长的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合短肽对MAbs的抗原表位进行鉴定,结果表明:MAb 2G4识别的抗原表位为281LCRLLSTIGRKMCNTE26.本研究结果为BTV8型特异性检测方法的建立及VP2蛋白结构和功能的研究奠定了基础.