单增李斯特菌(LM90)inlA单基因及inlB/inlA双基因缺失株的构建及其生物学特性初步研究

为探究内化素inlA、inIB基因缺失对单核细胞增生性李斯特菌(LM)生物学特性的影响,本研究采用同源重组技术构建了inlA基因缺失株(LM90-inlA)和inlB、inlA双基因缺失株(LM90-△inlB/△inlA),并对其生物学特性进行了初步研究.结果显示:PCR和测序结果证实成功构建了目的基因(inlA、inlB)缺失株;菌落PCR和测序结果显示2种缺失株在体外连续培养20代过程中均能稳定遗传;生长特性实验表明2种缺失株与亲本株生长差异无统计学意义(tLM90/LM90-△ inla=0.34,p＞0.05;tLM90/LM90-△ inlB/△ inlA=0.324,p＞0.05;tLM/90/LM90-△ omlB/△ inla=0.008,p＞0.05)且inlA缺失后2缺失株对小鼠的LD50分别升高了0.64、1.26个对数数量级.研究结果表明inlA基因和inlB基因对LM90的部分生物学特性具有一定的调控作用,这对于阐明LM毒力因子的致病机理提供了参考依据,也为研究内化素介导LM穿越血脑屏障(BBB)的作用机制奠定了科学基础.