定量检测PD-1单克隆抗体ELISA法的建立

目的 建立一种高特异、高灵敏、新型的定量检测食蟹猴血清中PD-1单克隆抗体质量浓度的ELISA方法.方法 用重组人PD-1作为抗原包被到96孔板上,加入系列浓度标准品(PD-1单克隆抗体)和稀释的食蟹猴血清,再加入稀释的猴血清吸附的羊抗人IgG-HRP(二抗),二抗与结合到抗原上的PD-1单克隆抗体特异性结合,加入底物显色剂,用硫酸终止,在450 nm下读数.结果 在40～0.625 ng/ml范围内,PD-1单克隆抗体质量浓度的对数值与吸光值呈S形曲线,方法灵敏度为0.625 ng/ml,TNF-α、rHSA、PEG-GH和受试品PD-1单克隆抗体均无交叉反应,方法的回收率为94.5％ ～98.0％,板内精密度波动在-4.1％～-0.1％,板间精密度波动在-5.0％～-1.0％.结论 本方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则的要求,可用于食蟹猴体内PD-1单克隆抗体的定量检测.