两质粒系统重配甲型H1N1流感病毒株的研究

目的 构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率.方法 本研究通过构建克隆载体pfastbac △plhHTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60 (H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plhHTBP6.同时将流感病毒A/California/7/2009 (H 1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入pENTR-1A质粒,获得pENTR-1AP2.将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定.结果 本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1) Vca,重配病毒株传代后HA效价为28,形态符合流感病毒典型特征,大小80～120 nm,具有冷适应、温度敏感表型.结论 两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略.