口蹄疫病毒O、A和Asia Ⅰ型分型基因芯片的构建与评价

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一种高度接触传染性动物疫病.本研究拟建立一种能区分FMDV O/A/Asia Ⅰ型的基因芯片.根据FMDV O/A/Asia Ⅰ型的VP1基因序列设计3对特异性引物,用RT-PCR扩增获得248、206和239 bp的三个靶基因片段,并针对这三个片段分别设计了3种探针,以引物荧光标记法标记靶基因,建立了一种鉴别FMDV O/A/Asia Ⅰ型的分型基因芯片并进行了敏感性、特异性、重复性和保存期评价.结果表明最佳反应条件为:水化温度37℃,封闭液为0.25％ BH4Na/25％乙醇,杂交温度为42℃.灵敏性实验表明,FMDV-O检测限为118 pg/mL,FMDV-A为18.4 pg/mL,FMDV-Asia Ⅰ为129 pg/mL,芯片方法灵敏度比常规RT-PCR高10～100倍;特异性实验表明,O、A和Asia Ⅰ三型之间无交叉杂交;该芯片可至少保存3个月仍能重复使用.本研究建立的FMDV分型基因芯片为O、A和Asia Ⅰ型鉴别提供了新方法.