养殖梭鱼格氏乳球菌的分离鉴定及致病性研究

2018年夏浙江宁波某淡水游钓场梭鱼(Liza haematocheila)出现大规模持续发病,6～8月累计死亡率达60％以上.濒死鱼池边独游或水面打转,突眼、眼膜增厚或不透明,腹部膨胀;解剖可见腹水,肝、脾肿大和局部出血,腹内鳔和肾相邻处有花斑状假膜形成,隔层内充气.为进一步探究病因,用营养琼脂、脑心浸液琼脂培养基从3尾典型症状病鱼的脑、肝、脾和肾分离到圆形、湿润、灰白色,菌落直径1～4 mm的8株革兰阳性短链球菌(命名为Lh-1～Lh-8);用VITEK-2-Compact生理生化鉴定,与格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)相似性达99％;用16S rDNA、gyrB(gyrase B)等基因进行分子鉴定,序列同源性比对显示与格氏乳球菌相似性分别达100％和93.5％,均表明为格氏乳球菌.取Lh-3腹腔注射健康梭鱼,感染2～5 d后可见自然发病症状,并重新分离到格氏乳球菌,LD50为5.86×104 CFU/尾.Lh-3在血琼脂平板呈典型α溶血,脱脂乳平板未出现透明圈.Lh-3腹腔注射和灌胃4周龄美国癌症研究所(Institute of Cancer Research,ICR)小鼠(Mus musculus),12 h后出现全身竖毛、眼部红肿、四肢颤栗等现象,1×109 CFU/只攻毒组24 h内死亡率达100％,感染小鼠可见肝、肺、腹腔内壁充血等病理变化.证实所分离的格氏乳球菌是本次梭鱼发病的病原体,对梭鱼有很强毒性,是养殖梭鱼的重要病原体;对小鼠有一定的致病力,是潜在的人鱼共患病原.本研究为梭鱼乃至水产养殖病害防控提供了一定的参考.