一株特异腐质霉纤维素酶高产突变株的鉴定分析

高温真菌特异腐质霉(Humicola insolens)具有强大的纤维素酶分泌和纤维素降解能力,因此在生物质能源、饲料和纺织工业等领域中具有良好的应用前景.在特异腐质霉T-DNA随机插入突变体库中筛选得到一株纤维素酶高产菌株T53.在纤维素诱导培养条件下,突变株T53发酵上清中的滤纸酶活力、内切β-1,4葡聚糖酶活力、纤维二糖水解酶活力、β-葡萄糖苷酶活力以及木聚糖酶活力较野生型菌株分别提高了40％、60％、90％、10％、60％.蛋白电泳结果显示,T53菌株的胞外总蛋白特别是纤维素酶与半纤维素酶的分泌量较野生型菌株有显著提高.TAIL-PCR克隆鉴定了T53菌株中的T-DNA插入位点侧翼序列,结果表明T-DNA插入位点位于一个可能的C2H2型锌指蛋白类转录因子编码基因的上游启动子区域.这为揭示突变株T53中纤维素酶的高产分子机制奠定了重要基础,有助于理解特异腐质霉中纤维素酶的表达调控机制,为特异腐质霉纤维素酶高产工程菌的构建奠定了理论和技术基础.