阻断型抗人CD258(LIGHT)单克隆抗体的研制及生物学特性的鉴定

目的 分析CD258 (LIGHT)/单纯疱疹病毒侵入介体(HVEM)介导的信号通路对T细胞的协同刺激作用与机制.方法 以基因转染细胞L929/LIGHT为免疫原免疫小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶脱氧核苷(HAT)选择性培养基培养杂交瘤细胞.流式细胞术分析筛选阳性克隆,经过4次亚克隆化培养,获得1株小鼠抗人LIGHT单克隆抗体(mAb),检测其是否识别特异性抗原位点,体外外周血单个核细胞(PBMC)与LIGHT mAb共培养.结果 反复筛选并亚克隆获得一株鼠抗人LIGHT单克隆抗体7A8,亚类为IgG2b,轻链为κ型.流式细胞术分析该mAb特异性识别细胞表面的LIGHT分子.LIGHT mAb与转基因细胞的结合率受到HVEM-Ig融合蛋白干预而有所降低.PBMC与LIGHT转基因细胞体外共培养实验证实,该mAb阻断淋巴细胞活化和增殖,进一步减少细胞因子分泌.结论 成功获得一株特异性识别人LIGHT分子的单克隆抗体7A8,与HVEM-Ig融合蛋白结合L929/LIGHT的抗原表位不完全相同,是一株有阻断效应的功能型抗体.