淮阳山病毒NSs基因在THP-1细胞中的稳定表达及其对白细胞介素-6的调节作用
Amino Acids and Biotic Resources（2016）
摘要
淮阳山病毒(Huaiyangshan virus,HYSV)是一种能引起人类发热伴血小板减少综合征的新型布尼亚病毒.NSs是淮阳山病毒的毒力因子,可能在病毒的致病中起重要的作用.本研究从构建好的含HYSV NSs基因的重组质粒pBlunt-NSs中扩增出NSs基因,然后克隆到慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen中构建重组质粒pHAGE-NSs;利用脂质体将pHAGE-NSs与包装质粒psPAX2、包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,在荧光显微镜下可见大量绿色荧光,收上清,即慢病毒悬液;将慢病毒悬液感染THP-1细胞后,通过绿色荧光蛋白进行流式分选、Western blot验证获得稳定表达NSs蛋白的THP-1细胞.利用人白介素-6 ELISA检测试剂盒检测NSs蛋白对白介素-6的调节作用,结果表明,NSs蛋白能激活THP-1细胞产生白细胞介素-6.
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