梅花鹿重组Galectin-1的表达及多克隆抗体的制备与鉴定

半乳糖凝集素-1(Galectin-1)是最先被报道的哺乳动物半乳糖凝集素,存在于多种组织和细胞内,参与细胞的粘附、增殖、凋亡和炎症反应等多种生理病理过程,并且与免疫系统的调节和肿瘤的发生发展密切相关.鹿茸是哺乳动物中罕见的能够周期性的脱落和再生的附属器官,作为研究哺乳动物器官再生的新模型受到关注.鹿茸再生是一个基于干细胞的过程,定位于角柄骨膜的干细胞是鹿茸再生的基础,Galectin-1在角柄骨膜细胞(pedicle periosteum cell,PPC)中高度表达,提示其在鹿茸再生中发挥着重要的作用.由于尚没有商用的鹿Galectin-1蛋白及其抗体,为进一步研究Galectin-1在鹿茸再生中的生物学功能,需要制备相应的蛋白和抗体,本实验将梅花鹿Galectin-1基因与pET28a连接,并将重组质粒pET28a-Galectin-1转入大肠杆菌(Esche-richiacoli) BL21 (DE3)中诱导表达.用Ni-NTA Agarose亲和层析纯化融合蛋白,免疫兔制备多克隆抗体.酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测抗体效价、Western blot检测抗体特异性、细胞免疫荧光检测Galectin-1在角柄骨膜细胞中的表达情况.结果表明,本实验成功诱导重组原核表达载体pET28a-Galectin-1在BL21 (DE3)中表达,通过Ni纯化获得融合蛋白.ELISA结果显示,抗体效价达到1∶64000,Western blot结果表明该抗体特异性良好,细胞免疫荧光显示Galectin-1在PPC全细胞中表达.本实验获得了纯化的鹿Galectin-1蛋白和特异性较好的多克隆抗体,为揭示Galectin-1在鹿茸再生调控中的作用提供了重要的实验材料.