观察在体灌注SCL基因重组慢病毒对豚鼠糖尿病膀胱中ICC功能的影响

目的 探究豚鼠糖尿病膀胱病(DCP)在经尿道灌注干细胞白血病(SCL)基因重组慢病毒后所引发的Cajal样间质细胞(ICC)电位活动的改变.方法 购买健康雄性豚鼠90只,按照200 mg/kg单次腹腔注射1％的链脲佐菌素(STZ),正常喂养12周后,筛选出符合DCP模型标准的的豚鼠并将其随机分为3组:实验组、阳性对照组、空白对照组.实验组经尿道灌注0.2 mL滴度为2×107IU的SCL基因重组慢病毒,阳性对照组经尿道灌注0.2 mL空慢病毒,空白对照组经尿道灌注0.2 mL PBS液.每组在转染后2、7、14、28 d这4个时间节点每次处死3只豚鼠,迅速摘取膀胱,选择胶原酶V消融法分离提取初代ICC并继续培养.72 h后运用膜片钳技术检测ICC自发及ATP诱发电位活动.结果 体外通过胶原酶消融法可分离培养DCP豚鼠膀胱中ICC,运用细胞膜片钳技术观察到在无刺激条件下检测不到ICC的内向电流,而在ATP(100 μmol/L)条件激发下可检测到ICC的内向电流.实验组2d时与其他两组内向电流无明显变化,实验组SCL慢病毒转染DCP膀胱7、14、28 d时可检测到ICC内向电流比其他两组高(P＜0.05),14 d达到峰值350.0±29.9pA,随后降低.阳性对照组与空白对照组随着DCP膀胱持续受损,内向电流逐步降低(P＜0.05).结论 SCL基因重组慢病毒经尿道灌注可成功转染豚鼠DCP膀胱,使受损的膀胱ICC电流幅度逐步增高,说明SCL基因对DCP膀胱中受损ICC功能有部分改善作用.