小拟南芥转运蛋白基因及NHX2基因的克隆与表达

转运蛋白(transport protein)是膜蛋白的一大类,介导生物膜内外的化学物质及信号的交换.植物体内存在多个与Na+转运相关的蛋白,其中液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白(Vacuolar Na+/H+antiporter,NHX)在离子稳态和提高植物耐盐性方面发挥着重要作用.为了深入了解转运蛋白基因在短命植物小拟南芥(Arabidopsis pumila)耐盐方面的作用,本研究首先基于小拟南芥响应高盐胁迫叶片转录组数据筛选出1157个转运蛋白基因,按功能分为Na+转运蛋白,K+转运蛋白,Ca2+转运蛋白,ABC转运蛋白以及糖转运蛋白等,其中功能注释为Na+转运蛋白的基因有24个.K均值(K-means)聚类分析结果显示,1157个转运蛋白基因分布于20个K subcluster,其中在K6、K9、K15子聚类中的基因数量分布较多,分别为172、193、190个.在分布于K6子聚类的Na+转运蛋白基因中,有一个编码NHX2蛋白的基因经盐胁迫处理后明显上调表达.采用RT-PCR克隆了ApNHX2基因,ApNHX2开放阅读框1626 bp,编码541个氨基酸.ApNHX2蛋白是一个典型的跨膜转运蛋白,具有12个跨膜结构区.系统进化分析表明ApNHX2与拟南芥AtNHX2亲缘关系最近.实时荧光定量PCR分析显示,ApNHX2基因在小拟南芥各组织中均有表达,但在花中表达量最高.为进一步研究该基因的功能,构建了过量表达载体35S:ApNHX2并转化农杆菌GV3101.本研究为进一步阐述转运蛋白基因在小拟南芥响应盐胁迫中的功能机制奠定了基础.