Mise au point d’un modèle de culture original de cellules musculaires squelettiques à partir de biopsies musculaires humaines

Introduction L’objectif de ce travail etait la mise au point d’un modele de culture de cellules musculaires squelettiques primaires obtenues a partir de biopsies musculaires humaines. Materiels et methodes Les biopsies musculaires ont ete prelevees post-mortem au niveau du vastus lateralis. Les biopsies ont ete digerees avec de la collagenase 1A 1 mg/mL et de la dispase II 4,8 mg/mL pendant 60 minutes a 37 °C afin d’isoler les fibroblastes et les cellules satellites. Ensuite, les cellules satellites ont ete purifiees selon deux methodes : le pre-placage ou le tri cellulaire immunomagnetique en utilisant un anticorps anti-CD56, une glycoproteine transmembranaire s’exprimant a la surface des myoblastes. Le rendement de ces methodes de purification des cellules satellites a ete evalue par FACS. Nous avons egalement compare deux milieux de proliferation (10 % FBS vs 10 % FBS + 2 %Ultroser G [UG]) sur le parametre du temps de dedoublement des cellules. Deux milieux de differenciation (2 % FBS vs 0,5 % UG) ont ete testes sur l’index myogenique qui correspond a la proportion de cellules ayant fusionnees pour former des myotubes. Cet index a ete determine par la detection de la myosin heavy chain (MYH) par immunofluorescence. Enfin, nous avons etudie l’expression de plusieurs marqueurs de la differenciation des cellules musculaires au cours de la myogenese par qRT-PCR et immunofluorescence. Resultats Les cellules provenant de la digestion de la biopsie contiennent des proportions variables de cellules satellites CD56+ (83,79 ± 11,88 %). La methode de tri cellulaire immunomagnetique a permis d’enrichir plus l’extrait cellulaire en cellules satellites CD56+ (95,59 ± 3,36 %) que la methode du pre-placage (81,29 ± 7,76 %). Le milieu de proliferation contenant 10 % de FBS et 2 % d’UG permettait d’obtenir un temps de dedoublement significativement plus court et une meilleure reproductibilite que le milieu de proliferation contenant seulement 10 % de FBS (25,46 ± 4,9 h vs 70,19 ± 22,9 h, p = 0,0286). Le milieu de differenciation contenant du 0,5 % d’UG permettait d’obtenir un meilleur index myogenique que le milieu contenant 2 % de FBS (55,97 ± 18,63 % vs 59,09 % ± 12,84 %). Enfin, l’augmentation de MyoD1, myogenin et MYH temoignait de la transition phenotypique de nos cellules en phenotype myogenique. Discussion Le tri cellulaire immunomagnetique permet de mieux separer les cellules satellites et les fibroblastes que la technique du pre-placage classiquement utilise. Le substitut de serum UG permet d’accelerer la proliferation cellulaire et d’ameliorer la differenciation des myoblastes en myotubes. Les marqueurs MyoD1, myogenin et MYH sont de bons marqueurs de la differenciation myogenique des cellules satellites. Conclusion Ce modele permet de purifier des cellules satellites musculaires a partir de biopsies musculaires humaines. Ces cellules peuvent etre utilisees lors d’etudes in vitro afin d’etudier les mecanismes physiopathologiques des maladies musculaire et les mecanismes d’action de traitements.