基于核酸外切酶Ⅰ辅助目标物循环放大策略的非标记适配体荧光传感器检测土霉素

建立了基于核酸适配体的特异性识别和核酸外切酶Ⅰ(ExoⅠ)辅助目标物循环放大的非标记荧光检测方法,用于土霉素的定量测定.体系中无土霉素时,SYBR Green I(SGI)分子可以插入土霉素适配体与其互补链形成的双链DNA(dsDNA)中,并在495 nm光激发下产生强烈的荧光发射.在土霉素存在时,由于核酸适配体与土霉素之间的强亲和力而特异性结合,dsDNA被打开并释放出SGI,游离的SGI荧光明显减弱.为了增强土霉素存在时引起的SGI荧光猝灭效应,采用ExoⅠ辅助目标物循环放大的策略.丙烯酰胺凝胶电泳实验结果证实,ExoⅠ可选择性降解单链DNA以及与土霉素结合的核酸适配体.被释放的土霉素参与下一个循环,不断破坏dsDNA,游离的SGI增多,荧光逐渐减弱.基于ExoⅠ辅助目标物循环放大的策略,检测灵敏度得到了有效提高.在最优实验条件下,本方法检测土霉素的线性范围为0.01～10μg/mL,检出限(3σ)为6.77 ng/mL.采用本方法检测实际样品牛奶和蜂蜜中的土霉素,牛奶样品的加标回收率为93.0％ ～105.1％,相对标准偏差(RSD)为0.5％ ～6.2％,蜂蜜样品的加标回收率为94.0％ ～95.8％,RSD为0.3％ ～7.7％.此荧光传感器具有成本低、灵敏度高和特异性好等优点,在快速检测食品有害物残留方面具有良好的应用潜力.