富血小板血浆中血小板源性生长因子促进家兔髓核细胞Ⅱ型胶原及蛋白多聚糖表达机制的研究

目的 研究富血小板血浆(PRP)中血小板源性生长因子(PDGF)对促进家兔椎间盘Ⅱ型胶原蛋白(collagen Ⅱ)及蛋白多聚糖(aggrecan)表达的作用及其机制.方法 对13只3月龄新西兰大白兔椎间盘细胞进行分离培养,随机将培养细胞分成对照组、PRP组、PRP+AG1296组(PDGF因子抑制剂AG1296)、AG1296组,n=12.检测4组髓核细胞7 d中的生存率.荧光定量RT-PCR法检测collagen Ⅱ、aggrecan的mRNA表达.在上述分组基础上,加入PRP+PD98059组[细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路抑制剂PD98059]、PRP+Wortmannin组[磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI-3K/Akt)通路抑制Wortmannin]、PRP+PD98059+Wortmannin组,共7组;Western-blot法检测7组细胞磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、泛细胞外调节蛋白激酶(panERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、collagen Ⅱ、aggrecan的蛋白表达.结果 与对照组相比,PRP组可显著增加家兔髓核细胞的生存率、collagenⅡ及aggrecan的mRNA表达水平(P均＜0.05);与PRP组相比,PRP+AG1296组的上述指标均显著下降(P均＜0.05).PRP组的p-ERK、p-Akt、collagen Ⅱ及aggrecan蛋白表达明显高于对照组(P均＜0.05);与PRP组比较,PRP+AG1296组4种蛋白表达均明显降低(P均＜0.05);加入ERK和PI-3-K/Akt通路抑制剂PD98059及Wortmannin处理的各组p-ERK、p-Akt、collagen Ⅱ及aggrecan蛋白的表达均降低(P均＜0.05).结论 PRP中PDGF可促进家兔髓核细胞的生存,并通过激活ERK和Akt信号通路上调髓核细胞collagen Ⅱ及aggrecan的表达.