嵌合犬瘟热病毒rHBF-vacH株的构建及鉴定

为了明确我国犬瘟热病毒流行毒株的关键毒力基因及其致病机制,本研究构建了一株表达疫苗毒株H基因的嵌合犬瘟热病毒rHBF-vacH.犬瘟热病毒的囊膜蛋白H和F,决定着犬瘟热病毒宿主嗜性和致病性,也是产生免疫保护的关键抗原.因此,本研究以GenBank中公布的犬瘟热病毒疫苗毒株Onderstepoort序列(AF378705)为模板,利用Primer Premier 6.0设计特异性引物,扩增其H基因,将Onderstepoort的H基因定向克隆至pcDNA3.2-HBF-1中,筛选获得正确的全长重组质粒pcDNA3.2-HBF-vacH之后,通过病毒拯救,获得嵌合病毒rHBF-vacH,最后,通过免疫荧光、RT-PCR和电镜观察,初步鉴定嵌合病毒rHBF-vacH的基因组中携带有犬瘟热病毒疫苗毒Onderstepoort的H基因.本研究构建的嵌合病毒rHBF-vacH为国内犬瘟热病毒流行毒株H基因致病性研究提供了技术平台,有助于设计重组犬瘟热疫苗.