BALB/C小鼠骨髓源性树突状细胞的定向诱导分化及鉴定

目的 构建BALB/C小鼠骨髓源树突状细胞(dendritic cell,DC)的体外制备体系,制备DC前体库.方法 提取BALB/C小鼠股骨骨髓,采取MACS装置洗脱并提纯出CD117+造血干细胞(HSC),添加分化因子rmSCF及白介素3(IL-3),促进细胞体外增殖.添加基础因子(rmGM-CSF)和白介素4(IL-4)促使HSC定向扩增为DC.分别加入不同的细胞因子(TNF-α或IL-10)控制DC的成熟度.进行形态(光镜和电镜)、表面分子标记(FACS法)及细胞因子分泌水平鉴定.结果 ①利用本体系制备的HSC纯度大于95％;②联合添加rmSCF及IL-3能充分诱导HSC增殖;③培养的成熟DC(mDC)及未成熟DC(imDC)电镜下形态明显不同,透射电镜显示其吞噬功能亦有明显区别;④表面分子标记CD40、CD80、CD86、I-A/I-E在imDC呈低水平表达,而在mDC呈中水平或高水平表达,有明显不同(P<0.01);⑤添加炎症因子脂多糖(LPS)后,imDC的IL-12分泌水平与未刺激组差异无统计学意义(P=0.064),但mDC的IL-12水平明显增加(P=0.009).LPS与TNF-α在刺激DC成熟上有协同作用.结论 适当的细胞因子能控制Graves病(GD)模型小鼠的骨髓源HSC定向扩增为DC,且能限定DC的成熟状态.本研究使基因修饰DC用于GD免疫防治成为可能.