异丹叶大黄素对血小板源性生长因子-BB诱导的肺动脉平滑肌细增殖的影响研究

目的:观察异丹叶大黄素(Isorhapontigenin,ISO)对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响,并探讨其机制.方法:本研究采用20 ng·ml-1 PDGF-BB刺激SD大鼠原代PASMCs建立细胞增殖模型,通过不同浓度的ISO(5,10,20 μmol·L-1)干预,分别在12,24,48 h后通过CCK-8和BrdU试剂盒检测细胞增值与DNA合成,筛选ISO抑制PASMCs增殖的最适浓度,不同浓度的ISO孵育PASMCs后于12,24,48 h后通过0.4％台盼蓝染色法检测PASMCs存活率;选择20 μmol·L-1 ISO与PDGF-BB共同孵育PASMCs 24 h后,通过流式细胞仪分析细胞周期,荧光酶标仪检测细胞内活性氧族(ROS)产生,采用超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒测定的SOD的含量,细胞丙二醛(MDA)检测试剂盒检测MDA的含量,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)与Western Blot检测细胞内还原型辅酶Ⅱ氧化酶1(Nox1)、细胞内还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(Nox4)mRNA与蛋白的表达.结果:CCK-8和BrdU检测结果表明ISO可浓度及时间依赖性抑制PDGF-BB刺激的PASMCs增殖及DNA合成(P＜0.05);流式细胞仪检测检测结果表明ISO可抑制PDGF-BB诱导的PASMCs分裂,阻滞PASMCs细胞周期于G0/G1期(P＜0.05);荧光酶标仪检测结果表明ISO可抑制PDGF-BB诱导PASMCs内ROS的产生(P＜0.05);SOD和MDA活性检测试剂盒检测结果表明ISO能够拮抗PDGF-BB诱导PASMCs内SOD的表达下调以及MDA的表达上调(P＜0.05);RT-PCR与Western Blot显示ISO能够抑制PASMCs内Nox1/4 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05).结论:ISO能够抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增值,其机制可能与抑制氧化应激有关.