Y-box结合蛋白1通过Gli2调控肝祖细胞增殖

目的 探索Y-box结合蛋白1(YB-1)对肝祖细胞(HPC)增殖的影响及机制.方法 慢病毒载体系统下调YB-1的表达,细胞增殖实验和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期;RNA测序分析YB-1对HPC表达谱的影响;染色质免疫共沉淀结合高通量测序(ChIP-sequence)检测YB-1在HPC中的靶基因;实时PCR和蛋白质印迹检测相关基因表达;ChIP-PCR验证YB-1与Gli2启动子结合;荧光素酶报告基因实验分析YB-1调控Gli2的转录;Gli1/Gli2阻滞剂与HPC共培养并检测细胞增殖.结果 YB-1 mRNA下调67％和75％后HPC增殖率分别下降58％和70％;RNA-sequence显示YB-1能调控Hedgehog信号通路、Wnt信号通路以及MAPK信号通路;ChIP-sequence显示YB-1在HPC中的靶基因参与细胞粘附、Wnt信号通路、Hedgehog信号通路,且YB-1能结合于Gli2启动子区;ChIP-PCR和荧光素酶报告基因实验表明YB-1能与Gli2结合并正调控其转录;实时PCR和蛋白质印迹证实YB-1可以调控Hedgehog信号通路上多种信号分子的表达;与对照组相比,Gli1/Gli2阻滞剂处理后处于有丝分裂期的HPC细胞数下降60％以上.结论 YB-1能与Gli2启动子区结合并正向调控其转录,进而调控HPC增殖.