顺铂短期给药诱发小鼠药源性虚证模型的评价研究

目的:研究顺铂短期给药诱发小鼠药源性证候的属性及对类固醇激素合成功能的影响.方法:40只雄性ICR小鼠随机分为对照组及顺铂不同剂量(3、5、10 mg·kg-1·d-1)组,每组10只.各药物干预组小鼠腹腔注射相应剂量的顺铂,连续5 d.分别于干预5 d后和停药5 d后,观察小鼠体征(体质量、摄食量、腋温、爪色泽),并进行行为学测试(抓力、旷场试验和转棒试验).观察期后,取血清;分离肾脏、心脏、胸腺和脾脏,计算脏器指数;收集肾上腺和睾丸.ELISA检测血清皮质酮和睾酮含量;HE染色后光镜下观察肾上腺与睾丸组织形态学变化;PCR、Western blot分别检测肾上腺皮质类固醇激素合成酶和睾丸睾酮合成酶相关的mRNA、蛋白表达.结果:①干预5 d后,顺铂10 mg·kg-1·d-1组小鼠体质量、摄食量、腋温、水平运动及垂直运动较对照组均显著降低(P＜0.05,P＜0.01);顺铂3、5mg·kg-1·d-1组小鼠腋温明显低于对照组,而爪色r值高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).停药5 d后,顺铂10 mg·kg-1·d-1组小鼠体质量、摄食量、在棒时间、抓力、腋温、爪色r值、水平运动及垂直运动较对照组均显著降低(P＜0.05,P＜0.01);顺铂3、5 mg·kg-1·d-1组小鼠垂直运动较对照组亦明显减少(P＜0.01).②与对照组相比,10 mg·kg-1·d-1顺铂作用显著抑制小鼠脾脏、胸腺、心脏,脏器指数明显降低(P＜0.05,P＜0.01),而肾脏指数显著升高(P＜0.01);5 mg·kg-1·d-1顺铂作用亦抑制心脏(P＜0.05).③形态学观察显示,顺铂10mg·kg-1·d-1组小鼠肾上腺皮质球状带细胞肿胀明显,顺铂5、10mg·kg-1·d-1组小鼠可见各级生精细胞排列略紊乱,睾丸间质细胞收缩明显.④与对照组相比,顺铂10 mg·kg-1·d-1组小鼠血清皮质酮含量显著升高(P＜0.01),血清睾酮含量无明显变化.⑤与对照组相比,顺铂3 mg·kg-1·d-1组小鼠肾上腺Star、Cyp21a1的mRNA表达受到抑制(P＜0.05),而顺铂10mg·kg-1·d-1组小鼠肾上腺Star、Cyp11b1、Cyp21a1的mRNA表达及StAR、CYP21A2、CYP11B1蛋白表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01).⑥与对照组相比,10 mg·kg-1·d-1顺铂作用显著抑制睾丸 StAR、CYP1 1A1、CYP17A1、HSD3B2的 mRNA 与蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01);5 mg·kg-1·d-1 顺铂干预显著抑制 Star 和Hsd3b2的 mRNA 表达(P＜0.05,P＜0.01);3 mg·kg-1·d-1 顺铂作用亦显著抑制 Cyp17a1 和Hsd3b2的mRNA表达(P＜0.01).结论:顺铂短期给药可诱发小鼠虚证表现,以精气亏虚为主,其物质基础与类固醇激素合成及储备下降有关.