人非小细胞肺癌组织分离获取单细胞方法的优化

[目的]优化人非小细胞肺癌组织获取单细胞的方法,提高单细胞的活率、回收率,减小抗原表位的影响.[方法]获取临床肺癌组织样本.比较4种不同浓度的Ⅳ型胶原酶(0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL)37℃消化30 min,血球计数板计数用7-氨基放线菌素(7-AAD)、CD45、CD3染色各组消化后的细胞,流式细胞仪检测细胞活率和抗原表位表达.[结果]各组细胞消化后细胞数量为:0.2 mg/mL组1.27±0.18×106个,0.5 mg/mL组2.15±0.21×106个,1.0 mg/mL组 1.04±0.14×106个,2.0 mg/mL 组0.25±0.03 x 106个;细胞活率分别为:0.2 mg/mL 组79.62±4.13％,0.5 mg/mL 组80.17±7.20％,1.0 mg/mL 组79.34±8.53％,2.0 mg/mL 组5.08±4.91％;CD45-比例分别为:0.2 mg/mL 组70.09±7.60％,0.5 mg/mL 组72.71±3.05％,1.0 mg/mL 组85.43±5.29％,2.0 mg/mL 组82.37±9.07％;CD45* 比例分别为:0.2 mg/mL组24.23±8.12％,0.5 mg/mL 组23.51±3.20％,1.0 mg/mL 组 11.93±6.81％,2.0 mg/mL 组 14.24±7.92％;CD3+比例分别为:0.2 mg/mL 组48.2±5.1％,0.5 mg/mL 组49.5±6.2％,1.0 mg/mL 组47.0±3.8％,2.0 mg/mL 组 15.2±2.9％.[结论]0.5 mg/mL 组 Ⅳ 型胶原酶消化细胞后,单细胞数量最多,细胞活率和CD45、CD3抗原表位较高.