边缘革蜱铁蛋白1的原核表达与理化特性分析

为探明蜱源铁蛋白1(FER1)在边缘革蜱铁代谢中的功能,本研究经PCR扩增了边缘革蜱源FER1基因编码区(CDs),测序结果显示FFER1基因CDs区为519 bp;BLAST分析其与硬蜱科常见蜱FER1的氨基酸序列同源性,利用Mega 6.0软件分析了 FER1基因与其他常见蜱该基因之间的系统进化关系;利用Swiss-model、Vaxijen2.0及Allertop等程序预测分析了 FER1的空间结构、抗原性等特性.结果显示,FER1基因与革蜱属其他种之间进化关系较近,其编码的氨基酸序列与硬蜱科常见蜱FER1氨基酸序列之间差异很小,边缘革蜱FER1基因的CDs区编码172个氨基酸,理论等电点(pI)为5.04,该蛋白以中空的24聚体形式存在,单个亚基的抗原位点主要集中在aa8～aa12、aa80～aa93处,位于24聚体模型表面,具有抗原性.氨基酸线性片段预测FER1未显示过敏性.将FER1基因克隆至原核表达载体,构建重组质粒pET-28a-FER1,表达重组FER1蛋白(rFER1),western blot检测其免疫原性,结果显示该蛋白具有良好的反应原性,并经His-Bind镍柱亲和层析获得纯化蛋白,其大小为25ku.本研究分析了 FER1蛋白的氨基酸序列同源及FER1基因的系统进化关系,预测了该蛋白的空间结构、抗原性等特性,通过重组蛋白表达与血清学试验,推断FER1可能存在于蜱唾液腺中,说明该蛋白具有作为抗蜱疫苗候选抗原的潜力.