精子特异性蛋白Cabs1多克隆抗体的制备及多用途验证

制备抗小鼠Cabs1 (Calcium-binding and spermatid-specific protein 1)多克隆抗体,以便进一步利用小鼠模型解析Cabs1蛋白在精子变形与精子功能调控中的功能.以密码子的简并性和偏好性为原则,优化小鼠Cabs1基因编码序列,构建重组表达载体ET-30a(+)/Cabs1,原核表达系统表达重组蛋白,免疫新西兰大白兔获得血清,通过亲和纯化得到Cabs1多克隆抗体.Western Blot、免疫荧光实验验证抗体的应用价值.结果 显示,获得了高效价、特异性识别Cabs1的多克隆抗体.Western Blot、免疫荧光实验发现小鼠Cabs1蛋白开始表达于长型精子阶段,在成熟精子中主要定位于顶体和主段.同时进一步发现该抗体还可以识别人Cabs1蛋白.此外,Cabs1抗体也可以识别天然未变性的Cabs1蛋白,用于鉴定和研究Cabs1蛋白的互作复合物.制备的抗体解决了目前商业化的Cabs1抗体均不能识别小鼠来源的Cabs1蛋白的问题.