利用Target SSR-seq技术鉴定温州蜜柑芽变材料

[目的]柑橘芽极易发生变异,用形态学的方法鉴定这些芽变材料,易受环境、栽培条件等因素影响,而利用深度测序技术开展柑橘芽变材料鉴定,能够获得变异位点的基因型;同时,建立的技术体系也有利于柑橘资源的精准鉴定、种质资源的遗传多样性研究和植物性品种权保护.[方法]本研究通过靶位点SSR测序技术对柑橘芽变材料开展鉴定.首先利用柑橘全基因组序列扫描发掘SSR,采用多态性较高的SSR位点用于柑橘芽变材料的区分,进一步利用多路复用PCR扩增构建SSR靶位点文库,并通过MiSeq深度测序方法对2份温州蜜柑芽变材料的SSR靶位点进行测序验证.再利用开发的SSR标记对22份优质柑橘种质资源进行遗传多样性分析.[结果]利用GMATA软件在克里曼丁红橘(Citrus clementina Hort.ex.Tanaka)参考基因组和温州蜜柑(Citrus unshiu Macf.)基因组中分别获得69101个和80193个SSR,其中以AT/TA为主的2基序SSR最多,3基序中以AAT最多,通过序列比对发掘出变异热点区域的高多态性SSR用于温州蜜柑芽变材料的检测,4对SSR引物能对22份柑橘材料进行准确区分.77对SSR靶位点的深度测序一次性对多个SSR位点进行基因分型,能准确鉴定出2份温州蜜柑芽变材料的SSR基因型,以及SSR在基因组上的准确位置.结合SSR以及SNP基因型,能够对2份温州蜜柑芽变材料进行有效区分.[结论]本研究开发了用于柑橘芽变材料区分的高效SSR位点发掘方法,结合靶位点多路扩增和Target SSR-seq的深度测序实现了柑橘芽变材料的高效区分.