茉莉花实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证

为筛选适合茉莉花的内参基因,以5种组织(根、茎、嫩叶、成熟叶、花)和4个发育阶段的花(幼蕾期、膨大花蕾期、最长花蕾期和初绽期)为试验材料,选择较常见的8个候选内参基因进行引物特异性分析,结果显示,8个内参基因均扩增出单一条带,溶解曲线均只有明显的单一峰.采用qRT-PCR技术分析8个内参基因在不同样品中的表达量,结果显示,内参基因在不同样品中的表达量存在差异,各基因在花中的表达量均显著低于其他样品.利用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件对基因的表达稳定性进行评价,并通过RefFinder对表达稳定性进行综合分析,结果表明,适用于不同组织(有花组)的最优内参基因为SAND和UPL7;适用于不同组织(无花组)的最优内参基因为UPL7和GAPDH;而适宜不同发育阶段花的最优内参基因为Actin和EFlα.进一步利用JsDXS和JsPAL2对筛选的内参基因进行验证,结果显示,以稳定性好的Actin、EF1α及Actin+ EF1α组合为参照时,JsDXS和JsPAL2在花发育不同阶段的表达水平的变化趋势基本一致,而用最不稳定的PP2A为参照时,花发育不同阶段的表达水平的变化趋势不一致.总之,本研究对茉莉花内参基因进行了筛选,不同组织(有花组)的最优内参基因为SAND和UPL7;不同组织(无花组)的最优内参基因为UPL7和GAPDH;花发育不同阶段的最优内参基因为Actin和EF1α.