鹌鹑MITF基因的克隆、表达及启动子甲基化研究

[目的]研究MITF基因在鹌鹑胚胎发育过程中的表达变化及其与羽色形成的关系,分析启动子甲基化对MITF基因表达的影响.[方法]利用RT-PCR克隆鹌鹑MITF基因mRNA的CDS区域并进行DNA测序,对得到的序列进行BLAST比对等生物信息学分析.利用RT-qPCR分析MITF基因在栗羽朝鲜鹌鹑和北京白羽鹌鹑胚胎发育第6、8、10、12和14天的表达变化.克隆朝鲜鹌鹑和北京白羽鹌鹑MITF基因的启动子区域并进行DNA测序,利用BS-PCR分析启动子CpG岛的甲基化水平.[结果]鹌鹑MITF基因与日本鹌鹑同源基因相似度达99％,包含1476?bp的开放阅读框,编码蛋白由492个氨基酸残基组成,没有信号肽和明显的跨膜区,成熟蛋白位于细胞核中.在胚胎发育的6～12?d,朝鲜鹌鹑MITF基因mRNA表达水平显著或极显著高于北京白羽鹌鹑(P<0.05或P<0.01).鹌鹑MITF基因启动子区域包含丰富的顺式作用元件和1个346?bp的CpG岛,朝鲜鹌鹑MITF基因启动子区域的平均甲基化水平为18.52％,北京白羽鹌鹑的平均甲基化水平为29.63％,两者差异显著(P<0.05).[结论]北京白羽鹌鹑MITF基因启动子区域高甲基化状态导致其表达水平下降,这与其羽色白化有一定的关系.