肠炎沙门菌非编码小RNA RyhB调控opE蛋白的表达研究

为研究肠炎沙门菌(SE)50336非编码小RNA(RyhB-1、RyhB-2)对毒力蛋白SopE的调控作用,利用pET原核表达系统表达SE50336 SopE蛋白,免疫BALB/c小鼠获得SopE蛋白的特异性多克隆抗体(多抗)并分析制备血清的特异性.通过Western-blot检测野生株SE50336、RyhB单缺失株(SE50336 △ryhB-1、SE50336 △ryhB-2),以及RyhB双缺失株(SE50336 △ryhB-1△ryhB-2)中SopE蛋白的表达水平,分析RyhB对SopE的调控作用.结果 显示:成功构建重组质粒pET28a-sopE,转化BL21 (DE3)感受态细胞后,在IPTG 0.3 mmol/L、温度37℃、转速220 r/min、诱导时间4h的条件下,SopE蛋白在包涵体中表达;Western-blot结果显示制备的多抗可特异性检测肠炎沙门菌SopE蛋白;与野生株相比,RyhB单缺失株SopE蛋白表达量下降,双缺失株下降更明显,表明RyhB-1和RyhB-2均可上调SopE蛋白的表达.以上结果为进一步研究RyhB-1和RyhB-2对SopE的调控作用机制奠定基础.