北京市1株猫传染性腹膜炎病毒的分离鉴定及遗传进化分析

为掌握北京市猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)与国内外毒株基因型之间的差异性,无菌采集北京市宠物医院4例疑似患有猫传染性腹膜炎病例的腹水和组织等病料样本,将经RT-PCR诊断为猫冠状病毒(FCoV)阳性的病料样本接种于猫肾细胞(CRFK)进行连续传代培养,结果分离到1株毒株.对分离毒株进行形态学观察,RT-PCR检测,TCID50测定以及基因测序及遗传演化分析.结果显示:该毒株在CRFK上出现典型细胞病变效应(CPE),且经连续细胞接种,可以得到稳定增殖;RT-PCR扩增获得与预期目的基因片段大小一致的条带,证实为FCoV,将其命名为FCoV BEJ5-2021(B5).对该毒株S、3c、7ab蛋白编码基因片段进行测序发现:在S蛋白基因分型上,该分离毒株属FCoV I型,与意大利参考分离株VGCaFn@14同源性为99.8％;基于3c蛋白基因分析,该毒株与德国参考分离毒株FIPV16F同源性为98.9％;基于7ab蛋白基因分析,该毒株与美国参考分离毒株FIPV-UCD 15b-1同源性为99.1％.不同组织病料分离毒株TCID50测定显示,肠管、脾等组织病料中的病毒滴度相对较高,气管中的滴度最低.结果表明:FCoV分离毒株不同基因分型对应不同血清型和生物型,因而基因进化树同源性分析只能确定遗传进化关系;分离毒株对猫肠、脾组织等有较强嗜性.本研究丰富了我国FIPV分子流行病学资料,为该病防控提供了参考.