SpyTag/SpyCatcher作用于多酶固定化系统的应用研究
Journal of Shandong Institute of Light Industry(Natural Science Edition)（2022）
摘要
利用一组相互作用多肽对SpyTag/SpyCatcher之间的特异相互作用,以麦芽寡糖基海藻糖合酶(MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)为作用酶研究其固定化的应用效果.将SpyCatcher与具有高亲和力的纤维素结合模块(CBM)融合,得到融合蛋白SC-CBM,利用CBM与纤维素之间的吸附作用将融合蛋白固定于纤维微球,形成稳定且通用的固定化载体,实现了79.8％的载体回收率.作用酶分别与SpyTag融合形成融合蛋白ST-treY和ST-treZ,其与SC-CBM之间的相互作用发现结合率分别达到60.3％和63％.应用此种特异性对接作用完成了ST-treY和ST-treZ在发酵液中的一步纯化及固定化,固定化率分别能达到69.6％和68.4％.因此,实现了SpyTag/SpyCatcher作为媒介的多酶固定化,为未来的多酶固定化系统打开了新思路,形成了通用固定化载体,节省了固定化步骤与成本,且能达到较高的回收效率.
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