局部基因治疗对兔新生骨痂中Wnt3a和β-连环蛋白表达的影响

目的:探讨电穿孔介导的局部基因治疗对兔下颌骨牵引区新生骨痂中Wnt3a和β -连环蛋白(catenin)表达的影响。方法:2019年9—12月，在南京医科大学友谊整形外科医院实验室进行实验，新西兰大白兔48只分为对照组、基因治疗组、生理盐水组，每组16只。3组动物双侧下颌骨截骨后4 d以0.8 mm/d速度行下颌骨牵引，连续牵引7 d进入固定期。对照组只行牵引；基因治疗组在牵引开始时在牵引区局部注射重组质粒pIRES-hBMP2-hVEGF165，并给予电穿孔刺激；生理盐水组在牵引开始时，在牵引区局部注射与基因治疗组相同剂量的生理盐水后，施加电穿孔刺激。3组分别于牵引结束、固定7、14、28 d取牵引区新生骨骨痂行免疫组织化学染色和RT-PCR检查Wnt3a和β-catenin表达。结果:免疫组织化学染色显示，Wnt3a和β-catenin主要定位于骨痂组织的成纤维细胞、软骨细胞、成骨细胞胞质和胞核中。免疫组织化学和RT-PCR检查结果显示，Wnt3a和β-catenin表达在牵引结束时达高峰，随着牵引张力的消失，逐渐降低。经基因治疗干预后，Wnt3a和β-catenin基因及蛋白表达显著升高，与对照组和生理盐水组比较，基因治疗组在各时点Wnt3a、β-catenin表达量最高，差异有统计学意义( F＝96.3， P<0.01)。 结论:基因治疗促进牵引区新生骨痂Wnt3a和β-catenin表达，以此调节骨重建系统的平衡，从而促进牵引区新骨生成。