CircSMARCA5通过miR-4295/PTEN轴调控糖酵解抑制胃癌细胞增殖和侵袭

背景与目的:胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤.作者既往研究发现circSMARCA5在胃癌中表达降低并能够抑制胃癌进展,但其具体机制目前仍不清楚.本研究探究circSMARCA5抑制胃癌细胞增殖和侵袭的分子机制.方法:采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)和transwell实验检测过表达circSMARCA5对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响.通过检测细胞外酸化率、葡萄糖摄取水平和乳酸生成量,分析过表达circSMARCA5对胃癌细胞糖酵解的影响.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测circSMARCA5、miR-4295和PTEN的基因表达,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测GLUT1和LDHA的蛋白水平.建立BACB/c裸小鼠皮下移植瘤模型,观察过表达circSMARCA5对移植瘤生长的影响,利用免疫组织化学方法检测两组皮下瘤中GLUT1、LDHA的表达水平及Ki-67增殖指数.通过双荧光素酶报告基因实验、Pearson相关性分析和RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)实验检测circSMARCA5与miR-4295、miR-4295及PTEN的靶向调控关系.结果:过表达circSMARCA5能够抑制胃癌细胞增殖和侵袭.CircSMARCA5过表达组细胞的糖酵解速率、糖酵解能力值、葡萄糖摄取水平和乳酸生成量均低于对照组.此外,过表达circSMARCA5能够抑制裸小鼠皮下移植瘤的生长.进一步研究发现,circSMARCA5可发挥分子海绵作用下调miR-4295表达,而miR-4295通过与PTEN mRNA的3′-UTR结合抑制PTEN表达.在circSMARCA5过表达组细胞中上调miR-4295或下调PTEN表达可部分逆转circSMARCA5对胃癌细胞增殖、侵袭和糖酵解的影响.结论:CircSMARCA5通过竞争性结合miR-4295上调PTEN表达,调控细胞糖酵解,从而抑制胃癌细胞的增殖和侵袭.