Mimics转染PC12细胞条件的优化

PC12作为模式细胞已被广泛应用于多种疾病研究.为探究高效、低毒的PC12的细胞转染方法,试验采用化学转染法,以带有5′-羧基荧光素(FAM)标记的NC mimics作为外源基因,分别用RFect、D-Portal、Tran?sIntroTM EL、Lipofectamine 3000和Lipofectamine 2000等5种转染试剂转染PC12细胞以筛选最佳转染试剂;然后设置NC-FAM mimics浓度为50、60、70、80、90、100 nmol/L,通过倒置荧光显微镜观察PC12细胞在最佳转染试剂下的荧光信号对转染效果进行评定.结果表明,在相同的培养条件下,不同转染试剂对PC12细胞的转染效果之间存在较大差异,其中,TransIntroTM EL转染后荧光强度最高,D-Portal、Lipofectamine 3000和Lipofectamine 2000转染后荧光信号次之,RFect转染后荧光信号最弱;且不同处理对细胞损害无显著差异.以TransIntroTM EL作为最佳转染试剂进一步优化NC-FAM mimics转染浓度发现,荧光强度随NC-FAM mimics浓度的增加呈现先增强后降低的趋势,且在NC-FAM mimics浓度为70 nmol/L时荧光信号最强;此外不同浓度下的细胞数量无显著差异.综上可见,以TransIntroTM EL作为转染试剂、NC-FAM mimics浓度为70 nmol/L时,转染后PC12细胞荧光强度最高,转染效果最好.