结缔组织生长因子在TGF-β2诱导的视网膜色素上皮细胞纤维化中的作用

目的 探讨不同浓度2型转化生长因子-β(TGF-β2)对视网膜色素上皮细胞(RPE)生物学特性及纤维化指标结缔组织生长因子(CTGF)的调控.方法 RPE细胞分别用0,1,5,10,15 ng/ml TGF-β2处理,并用CCK-8检测细胞增殖活性确定合适的TGF-β2浓度范围.根据CCK-8结果确定后续实验分为0,1,5,10 ng/ml TGF-β2组,倒置显微镜观察RPE细胞的形态变化,细胞划痕试验检测细胞的迁移能力,Western blot检测纤连蛋白(Fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMΑ)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)、闭锁小带蛋白(ZO-1)、CTGF的表达,PCR检测Fibronectin、α-SMA在mRNA水平的变化.结果 CCK-8结果显示,随着TGF-β2浓度的增加,细胞增殖显著增加(P<0.05),10 ng/ml和15 ng/ml TGF-β2刺激下RPE细胞的增殖活性差异没有统计学意义(P=0.9637).与0 ng/ml相比,1,5,10 ng/ml TGF-β2作用后,细胞形态逐渐从典型的鹅卵石样细胞转变为长梭形间充质样细胞.细胞划痕试验显示,与0 ng/ml相比,5,10 ng/ml TGF-β2刺激可显著提高RPE细胞的迁移能力(P<0.05).Western blot显示随着TGF-β2浓度增加Fibronectin、α-SMA蛋白表达逐渐增强,E-cadherin、ZO-1表达逐渐减弱,与0 ng/ml相比,5,10 ng/ml TGF-β2刺激后Fibronectin、α-SMA、E-cadherin、ZO-1表达的差异具有统计学意义(P<0.05),而5 ng/ml和10 ng/ml TGF-β2组之间α-SMA、E-cadherin、ZO-1的表达差异无统计学意义(P>0.05),而Fibronectin的表达差异具有统计学意义(P<0.05).PCR结果显示随着TGF-β2浓度增加Fibronectin、α-SMA的mRNA表达均提高,其中5 ng/ml、10 ng/ml TGF-β2组与0 ng/ml组间,5 ng/ml和10 ng/ml组间差异具有统计学意义(均P<0.05).纤维化指标CTGF蛋白的表达随着TGF-β2浓度增加逐渐升高,且两两之间比较差异具有统计学意义(均P<0.05).结论 TGF-β2可以诱导RPE细胞发生上皮间充质转化(EMT)过程,通过CTGF调节组织的纤维化过程.