hsa_circ_0008039和miR-484在SK-N-SH细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤中的作用:与Fis1的关系

Chinese Journal of Anesthesiology(2022)

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摘要
目的:评价hsa_circ_0008039和miR-484在人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞氧糖剥夺-复糖复氧(OGD/R)损伤中的作用及其与线粒体分裂蛋白1(Fis1)的关系。方法:体外培养SK-N-SH细胞至对数生长期,采用随机数字表法分为5组( n=25):对照组(C组)、OGD/R组、hsa_circ_0008039 siRNA组(S组)、hsa_circ_0008039过表达组(E组)和hsa_circ_0008039 siRNA+miR-484抑制剂组(S+I组)。C组细胞在正常条件下培养;S组、E组和S+I组分别转染has_circ_0008039 siRNA、has_circ_0008039过表达载体、has_circ_0008039 siRNA和miR-484抑制剂后,氧糖剥夺12 h复糖复氧24 h制备OGD/R损伤模型。于复糖复氧24 h时采用CCK-8法检测细胞活力和LDH漏出量,采用RT-qPCR法检测hsa_circ_0008039、miR-484和Fis1 mRNA的表达,Western blot法检测Fis1表达;双荧光素酶报告验证hsa_circ_0008039与miR-484的靶向关系。 结果:与C组比较,其余4组细胞活力降低,LDH漏出量增加,OGD/R组和E组hsa_circ_0008039和Fis1表达上调,miR-484表达下调,S组hsa_circ_0008039和Fis1表达下调,miR-484表达上调,S+I组hsa_circ_0008039和miR-484表达下调,Fis1表达上调( P<0.05);与OGD/R组比较,E组和S+I组细胞活力降低,LDH漏出量增加,S组细胞活力升高,LDH漏出量减少,E组hsa_circ_0008039和Fis1表达上调,miR-484表达下调,S组hsa_circ_0008039和Fis1表达下调,miR-484表达上调,S+I组hsa_circ_0008039和miR-484表达下调,Fis1表达上调( P<0.05);与S组比较,S+I组细胞活力降低,LDH漏出量增加,miR-484表达下调,Fis1表达上调( P<0.01)。双荧光素酶报告实验表明:has_circ_0008039靶向结合miR-484。 结论:hsa_circ_0008039靶向结合miR-484参与了SK-N-SH细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤的过程,与上调Fis1表达有关。
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关键词
Tumor cells, cultured,Hypoxia,Mitochondrial proteins,Neuroblastoma,MicroRNAs
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