复发性呼吸道乳头状瘤细胞原代培养中人乳头状瘤病毒含量的变化

目的 优化复发性呼吸道乳头状瘤(recurrent respiratory papilloma,RRP)细胞在体外原代培养的条件,并检测培养不同时间点单位细胞人乳头状瘤病毒(HPV)的含量.方法 采用组织块培养法培养7例喉乳头状瘤组织,利用低速离心法和过筛网去除细胞碎片来优化培养系统,并于培养的第2、7、14天采用荧光半定量PCR法检测HPV分型及病毒的相对含量变化.结果 原代细胞培养第2天,显微镜下可见"凹空状"HPV感染的原代上皮细胞.培养第10天大部分HPV感染的原代上皮细胞出现了明显的凋亡和坏死,未被感染的、直径较小的上皮细胞开始增殖.在传代培养的第30～45天后,原代细胞逐渐衰老死亡.HPV6在离体后拷贝数迅速降低,最后完全检测不到;而HPV11虽然在离体后拷贝数出现迅速降低,但随着培养时间延长,即使细胞的状态不佳,HPV11仍然能维持着较低的拷贝数.结论 RRP原代细胞的体外培养虽可以存活30 d以上,但随着培养时间的延长,HPV含量不能随细胞增殖而稳定扩增,HPV拷贝数骤降甚至消失,尚不能作为HPV感染性肿瘤的体外研究模型.