新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体制备及双抗体夹心ELISA抗原检测方法的建立

由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)自暴发以来,严重威胁着人类健康.建立一种快速、可靠、易操作的可用于SARS-CoV-2感染早期诊断的检测方法,对于疫情防控至关重要.SARS-CoV-2核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,NP)是抗原检测的理想靶点.为了建立一种可快速对SARS-CoV-2 NP进行定量检测的诊断方法,本研究通过免疫山羊制备羊抗SARS-CoV-2多克隆抗体并作为包被抗体,通过杂交瘤细胞技术制备鼠抗NP单克隆抗体并作为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA抗原检测方法.对反应条件进行优化,并验证其线性范围及检测下限、敏感性、特异性、稳定性及准确度.结果显示,建立的方法检测线性范围为1000 ng/mL～7.8 ng/mL,R2＞0.99,检测下限为3.9 ng/mL;敏感性为96.875％,特异性良好,与Vero细胞、SARS-CoV-2刺突蛋白、流感病毒等不发生交叉反应;批内和批间变异系数分别为2.1％～11.7％和4.3％～11.8％;检测样品回收率在94.3％～104.8％之间.结果表明,该方法特异性和稳定性好,敏感性和准确度高,可用于SARS-CoV-2 NP定量检测.