微小RNA-4318靶向调控外被体蛋白复合物亚基β’在前列腺癌迁移、侵袭转移中的作用

目的:探讨微小RNA-4318(miR-4318)靶向调控外被体蛋白复合物亚基β’(COPB2)在前列腺癌侵袭转移中的作用机制。方法:通过Target Scan Human 7.0数据库预测COPB2 3’非编码区(3’UTR)可能结合的miRNA，双荧光素酶报告基因验证miR-4318与COPB2的靶向关系。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测转染mimics及inhibitors后的蛋白及RNA表达量，通过Transwell法检测细胞的侵袭和迁移能力。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:Target Scan Human 7.0数据库预测COPB2 3’UTR区可能结合的miRNAs，结果显示miR-4318结合可能性最大。通过临床15对前列腺癌与癌旁组织中miRNAs的表达量比对，结果发现上述3种miRNAs中只有miR-4318在大部分癌组织中表达(10.18±9.32)低于癌旁组织(21.46±36.19)。双荧光素酶报告结果表明，对比mimic-NC和WT-COPB2共转染比较双荧光素酶相对活性(2.31±0.02)，miR-4318和WT-COPB2共转染明显降低DU145细胞的双荧光素酶相对活性(0.38±0.12)，差异有统计学意义( t＝92.870， P<0.05)。RT-qPCR结果显示，在PC3、DU145细胞中转染miR-4318 mimics后，miR-4318的表达水平(3.94±0.34、2.42±0.33)显著高于mimic-NC组(1.09±0.07、0.97±0.05)，差异有统计学意义( t＝11.630、6.157， P<0.05)；转染miR-4318 inhibitors(0.26±0.02、0.30±0.06)后，miR-4318的表达水平显著低于inhibitor-NC组(0.89±0.10、1.28±0.05)，差异有统计学意义( t＝8.768、18.550， P<0.05)。Western blot结果表明，在PC3、DU145细胞中miR-4318 mimics组和mimic-NC组表达量分别为(0.12±0.01、0.14±0.01)，(0.30±0.02、0.30±0.02)，miR-4318 mimics组明显低于NC组，上调miR-4318明显降低了COPB2的表达量，差异有统计学意义( t＝14.020、12.310， P<0.05)。miR-4318 inhibitors组(0.35±0.02、0.59±0.04)的表达量与inhibitor-NC组(0.31±0.02、0.29±0.02)比较，差异有统计学意义( t＝1.893、2.919， P<0.05)。Transwell实验结果显示，miR-4318 mimics组的PC3、DU145细胞迁移数分别为(19.15±0.98)、(28.60±3.23)个，显著低于mimic-NC组[(31.90±2.54)、(44.77±1.94)个]，差异有统计学意义( t＝6.630、6.069， P<0.05)，上调miR-4318能够抑制PC3、DU145细胞迁移能力。与inhibitor-NC组[(37.14±1.92)、(38.91±2.45)个]比较，miR-4318 inhibitors组的PC3、DU145细胞迁移数[(41.65±0.75)、(53.04±2.80)个]较高，差异有统计学意义( t＝3.081、2.900， P<0.05)。miR-4318 mimics组和mimic-NC组的PC3、DU145细胞侵袭数分别为(16.51±1.21)、(19.49±2.29)个和(24.50±2.60)、(25.14±1.53)个，miR-4318 mimics组明显低于mimic-NC组，差异有统计学意义( t＝3.391、5.371， P<0.05)。miR-4318 inhibitors组的PC3、DU145细胞侵袭数[(33.80±4.43)、(30.21±1.27)个]显著高于inhibitor-NC组[(24.72±0.10)、(26.29±0.88)个]，差异有统计学意义( t＝2.282、3.583， P<0.05)。 结论:miR-4318能够靶向调控COPB2表达，抑制前列腺癌细胞的侵袭和迁移能力。