利用流式细胞法鉴定马铃薯倍性方法的优化

为了建立适于马铃薯倍性鉴定的流式细胞法试验体系,以二倍体马铃薯'E'和四倍体马铃薯'青薯9号'为材料,分别利用LB01,Galbraith's和Tris·MgCl23种细胞核分离缓冲液制备马铃薯组培苗幼叶单细胞核悬浮液,比较离心和不离心及不同核酸染料碘化丙啶(Propidium iodide,PI)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)对流式细胞仪检测结果的影响.结果表明,3种核分离缓冲液对制备马铃薯组培苗幼叶单细胞核悬浮液存在差异,其中核分离缓冲液LB01的效果最好;不离心的效果和离心相比,离心的悬浮液中目的细胞少于不离心的;染料DAPI与PI相比,染色效果无明显差异.从而初步建立起一套利用流式细胞术鉴定马铃薯倍性的方法,该方法样品需求量小,且制备简单,测量快速,准确度高,背景碎片和杂峰较少,主峰清晰,是鉴定马铃薯染色体倍性的理想方法.