不同水平硒对oxLDL诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨不同水平硒对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926细胞)损伤的保护作用.方法 体外培养EA.hy926细胞,用不同浓度(0、0.05和0.5μmol·L-1)的亚硒酸钠(Na2SeO3)培养细胞24 h后,将细胞分为6组:缺硒组(0μmol·L-1 Se),正常硒组(0.05μmol·L-1 Se),补充硒组(0.5μmol·L-1 Se),缺硒(0μmol·L-1 Se)+oxLDL组,正常硒(0.05μmol·L-1 Se)+oxLDL组,补充硒(0.5μmol·L-1 Se)+oxLDL组,继续培养16 h后,采用MTT法检测细胞存活率,NADPH法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力,WST法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1法检测线粒体损伤情况,蛋白印迹法检测细胞GPx1和GPx4表达水平.结果 相同硒水平下,oxLDL能降低细胞存活率(P<0.05),降低细胞GPx和SOD活力,提高ROS水平(P均<0.05),降低线粒体膜电位,下调细胞GPx1和GPx4蛋白的表达水平(P均<0.05);细胞经oxLDL诱导后,与正常硒水平相比,缺硒不能保护oxLDL诱导的细胞氧化损伤,而补充硒可提高细胞存活率(P<0.05),并上调GPx1和GPx4蛋白表达水平(P均<0.05);其次,细胞未经oxLDL诱导时,与正常硒水平相比,缺硒使细胞存活率下降、GPx和SOD活力降低,MDA和ROS含量上升,GPx1和GPx4蛋白表达减少(P均<0.05),而补充硒能够促进GPx1和GPx4蛋白的表达(P均<0.05).结论 补充硒能够减缓oxLDL诱导EA.hy926细胞发生的氧化应激,且GPx1和GPx4参与此过程.