靶向PSMA多价纳米抗体的制备及其生物学活性表征

目的:构建原核表达系统,制备靶向前列腺特异性膜抗原(prostate-specific membrane antigen,PSMA)多价纳米抗体并初步评价其生物学活性.方法:Bglbrick法构建多价纳米抗体表达载体,转化至大肠杆菌表达并利用亲和层析法纯化.联合蛋白质电泳和Western blot验证纯化产物,BCA法检测表达量.通过免疫荧光和流式细胞术定性评估PSMA特异性亲和能力,细胞ELISA法定量检测PSMA亲和水平,流式细胞术检测内吞效率.结果:成功构建靶向PSMA单价、二价、三价和四价纳米抗体大肠杆菌表达菌株.发酵结果表明四种纳米抗体均能在摇瓶水平实现高效可溶表达,其中二价纳米抗体表达量最高[(259.14±23.56)mg/L],单价纳米抗体表达量最低[(100.58±6.27)mg/L].亲和实验结果证实四种纳米抗体均能特异性识别并结合PSMA阳性肿瘤细胞,与单价纳米抗体相比,二价、三价和四价纳米抗体对PSMA亲和能力分别提高了3.32倍、2.29倍和2.03倍.最后的内吞实验显示四种纳米抗体均能被PSMA阳性肿瘤细胞高效摄取,30 min内的摄取率均在80％以上.结论:靶向PSMA的多价纳米抗体,尤其是二价纳米抗体,具有比单价纳米抗体更高的产量和亲和水平,且具备不亚于单价纳米抗体的内吞效率,是未来基于PSMA肿瘤诊疗试剂开发的重要候选.