表达鸡传染性法氏囊病病毒变异株VP2基因的重组嵌合型新城疫病毒的构建与鉴定

QIAO Qilong,HUANG Qing,WANG Baiyu,YANG Panpan, ZHAO Yuezheng, WANG Baoling, CUI Lijin,MIAO Yuhe,ZHAO Jun

Chinese Journal of Veterinary Science（2022）

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摘要

为了研发防控IBDV变异株和基因Ⅶ型NDV感染的高效廉价多联疫苗,将IBDV中国流行变异株的VP2基因共有序列插入到含有基因Ⅶ型NDV毒株F和HN基因的嵌合型NDV LaSota-Ⅶ F/HN全长基因组cDNA的质粒pNDFL-ⅦF/HN中,构建含有IBDV变异毒株VP2基因的重组NDV全长感染性克隆pNDFL-Ⅶ F/HN-VP2.将pNDFL-ⅦF/HN-VP2 和辅助质粒共转染 BHK-21 细胞拯救重组 NDV rChiLaSota-VP2.利用 PCR 和 Western blot对重组NDV进行鉴定,并对重组病毒的生物学特性进行研究.结果显示,重组NDV rChiLaSota-VP2拯救成功并可以正确表达IBDV VP2蛋白.第25代重组NDV在鸡胚中的生物学特性研究表明,rChiLaSota-VP2保留了 LaSota株在鸡胚中高滴度复制、低致病性和遗传稳定性等生物学特性.重组NDV rChiLaSota-VP2的鸡胚半数感染量(EID50)峰值可达10-8.16/100μL,鸡胚平均致死时间(MDT)为134 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)均为0.本研究构建的表达IBDV变异株VP2基因的重组NDV rChiLaSota-VP2将为研发同时防控我国流行的基因Ⅶ型NDV及IBDV变异株感染的高效廉价多联疫苗奠定基础.

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