Comparaison de deux méthodes de décellularisation pour l’obtention d’une matrice extracellulaire sécrétée in vitro

Les modèles de culture cellulaire traditionnellement utilisés in vitro pour identifier des traitements et mieux comprendre la biologie des tumeurs sont généralement dépourvus du microenvironnement tumoral et échouent parfois à refléter la véritable réponse des cellules tumorales au sein de leur tissu d’origine. Les progrès récents dans l’obtention d’une matrice extracellulaire décellularisée (MECd) ouvrent de nouvelles voies pour l’ingénierie de nouveaux modèles cellulaires des tumeurs. La MECd peut être obtenue in vitro à partir d’une culture longue de fibroblastes suivie d’une lyse de ces derniers (décellularisation). Dans ce travail, nous avons comparé une méthode de décellularisation physique par cycles de congélation/décongélation ou chimique par détergent/base. Des fibroblastes de dermes (NHDF) ont été cultivés (50 000 cellules/mL) 24 h ou 7 jours. Méthode congélation/décongélation : 3 ou 5 cycles de congélation −80 °C pendant 30 min suivie incubation à 37 °C pendant 10 min. Méthode détergent/base : traitement des NHDF par du Triton X-100 (2 %) pendant 30 min puis par de l’ammoniaque à 0,05 N pendant 20 min. Pour les deux méthodes, traitement des NHDF restants par de l’ADNase puis trypsination. L’efficacité de la lyse a été évaluée par dosage de l’ADN génomique et par étude de la mortalité cellulaire (CMF). La méthode détergent/base présente une meilleure efficacité de décellularisation par rapport à la méthode congélation/décongélationen terme de matériel génomique subsistant après la lyse des NHDF de 24 h mais celle-ci est meilleure par la méthode congélation/décongélation pour les NHDF de 7 jours. Concernant le pourcentage de cellules mortes après la lyse, la méthode chimique montre une meilleure efficacité. Nos résultats sont cohérents avec ceux de Fernández-Pérez et Ahearne (2019). Outre l’impact des protocoles sur la lyse des fibroblastes, leur efficacité sur la préservation de l’intégrité de la MECd devra également être évaluée.