PAF对BV2细胞炎症因子分泌的影响及转录组学分析

探究血小板活化因子(Platelet activating factor,PAF)对BV2细胞炎症因子分泌的影响及初步推测其调控机制.外源PAF(2×10-5M)作用于BV2细胞24h,36h,48h后,①CCK8实验检测空白对照组,Mock组和PAF处理组细胞活性;②ELISA实验测炎症因子TNFα、IL-6、Cxcl2、IL-1a的分泌;③Western Blot检测炎症介质COX-2蛋白水平;④对PAF处理24h的BV2细胞以及对应的Mock组细胞进行RNA测序得到转录组测序结果;⑤GO和KEGG富集分析后,运用String数据库配合Cytoscape软件找出炎症相关的Hub基因并挑选出以下基因(Ccl4、Ccl3、Ccl7、IL-1a、Cxcl2、IL1f9、IL34、COX-2、Serpinb1a)进行qPCR验证.实验结果表明,PAF作用时间为 24 h,36 h,48 h后,相比对照组:①BV2细胞活性降低;②上清液中的炎症因子TNFa,IL-6,IL-1a,Cxcl2分泌增加;③炎症介质COX-2蛋白表达水平上调;④从组学中筛选出炎症反应相关的Hub基因有:COX-2、Ccl3、Ccl4、Cxcl2、Ccl7、IL-1a、Mapk14、Cd80、Casp1、Src、Nos2、Serpinb1a、Serpinb9、Il1r1;⑤qPCR验证表达上调的基因包括Ccl3、Ccl4、Ccl7、IL-1a、Cxcl2、IL1f9、IL34、COX-2,表达下调的基因Serpinb1a.说明PAF可以诱导BV2细胞释放炎症因子,PAF可能是促进"细胞因子风暴"的重要介质,根据转录组学分析结果我们锁定了炎症反应密切相关的14种Hub基因,并对产生炎症因子的分子机制提出了初步推测.