CRISPR/Cas9技术介导烟草CENH3基因突变体的获得

[目的]通过CRISPR/Cas9技术对烟草CENH3基因进行编辑,获得CENH3基因发生突变的植株,确定编辑载体的编辑效率与突变类型,建立高效基因组编辑技术体系.[方法]根据CENH3序列设计特异性编辑位点,构建CENH3编辑载体;采用农杆菌介导法转化烟草获得转基因植株,通过测序明确转基因植株的目标基因编辑效率与CENH3突变类型;利用微滴式数字PCR技术筛选低拷贝突变体植株.[结果]随机检测的11株转基因烟草植株,有6株被编辑,编辑效率为54.5％;编辑植株中,靶标1未发生突变,靶标2发生4种突变类型.6株编辑植株均为低拷贝植株,拷贝数为0.3～1.2.[结论]实现了对烟草CENH3的定点编辑,建立了CRISPR/Cas9介导的烟草CENH3基因组编辑体系.